Obtención de biliproteínas de interés biotecnológico industrial mediante cromatografía de adsorción en lecho expandido

Resumen

C-ficocianina y aloficocianina (ficocianinas) son biliproteínas que se encuentran formado parte de la microalga Spirulina platensis. Debido a su alta eficiencia fluorescente y a su único e intenso color azul, estas proteínas se utilizan como marcadores fluorescentes y reactivos químicos, y poseen un gran potencial deutilización como colorantes naturales en las industrias de alimentación y cosmética. Las metodologías convencionales de purificación de ficocianinas constan de múltiples etapas y operaciones. Cada una de estas etapas afecta al proceso de recuperación global, así como a la economía del mismo, aumentando los costes de operación y el tiempo de procesado, y disminuyendo el rendimiento. En este trabajo, se presenta una nueva metodología preparativa y escalable, para la obtención de ficocianinas, basada en las ventajosas propiedades de la cromatografía de adsorción en lecho expandido (CALE). Inicialmente las biliproteínas, se liberan del interior celular mediante choque osmótico y son capturadas por aplicación directa de la suspensión celular (extracto crudo de ficocianinas), en una columna de lecho expandido, rellena con un intercambiador aniónico (Streamline-DEAE) y equilibrada con tampón de fosfato 50 mM, pH 7.0. Después de la etapa de adsorción, la columna se lava en formato expandido, eliminando el material particulado y las moléculas no adsorbidas en el relleno. Posteriormente, se procede a la etapa de elución en formato empaquetado de las ficocianinas adsorbidas. Con esta nueva metodología el rendimiento medio de la etapa de CALE se estima alrededor de un 74 % de las ficocianinas contenidas en la biomasa de partida. El seguimiento del proceso, se ha realizado mediante electroforesis en condiciones desnaturalizantes (SDS-PAGE) y análisis espectroscópico.